江苏开放大学环境工程微生物学（本）形考作业3：完成教材中的任一实验

课程名称

环境工程微生物学

实验项目名称

 培养基的配制和灭菌

细菌的纯种分离、培养

接种技术及菌落形态的观察

姓 名

学号

同组人

实验时间

2018 年  12 月 2   日

实验地点

盐城工学院实验室

实验目的

1、熟悉玻璃器皿的洗涤与灭菌前的准备工作。

2、了解微生物培养基的基本原理，掌握配制、分装培养基的方法。

3、学习各类物品的包装、配制、灭菌技术。

4、从环境中分离、培养微生物，掌握一些常用微生物和纯化微生物的方法。

5、学会几种接种技术。

6、平板菌落计数。

7、抗Cu菌的筛选。

8、观察实验分离出来的几种细菌的个体形态及与其相应的菌落的形态特征。

9、通过观察和比较细菌，放线菌，酵母菌及霉菌的菌落形态，达到初步鉴别微生物的能力。

实验原理

1、培养基原理：培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的需要，有碳、氢‘氧、氮、磷、硫、钾、钙、钠、镁、铁、等微量元素和水，按一定的体积分数配制而成。调整适合的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。   由于微生物的种类及代谢类型的多样性，因而培养基放入种类也多，他们的配方及配制法也有所差异，但一般的配置过程大致相同。

本实验采用肉汤蛋白胨培养基、查氏培养基（筛选霉菌）、高氏1号淀粉琼脂培养基（筛选放线菌）。

2、灭菌原理:本次实验中培养基、移液枪头等采取加压蒸汽灭菌法。加压蒸汽灭菌器是能耐一定压力的密闭金属锅，加压灭菌的原理在于提高灭菌器内的蒸汽温度来达到灭菌的目的。培养皿等玻璃器皿用具采用干热灭菌法，另外还有膜过滤灭菌法。接种时对接种针等采用灼烧灭菌。

3、分离纯化原理：本实验使用的平板表面涂布法，是把聚集在一起的群体分散成能在培养基上长成单个菌落的分离方法。此法加样量不宜太多，只能在0.5mL以下，培养时起初不能倒置，现正置一段时间等水分蒸发后倒置。平板划线法也可以分离从而获得单一菌落以观察其形态特征。

4、微生物的接种原理：接种就是将一定量的微生物在无菌操作条件下转移到另一无菌的并适合该菌生长繁殖所需的培养基中的过程。本次实验采取斜面接种法、穿刺接种法，使用到的接种工具是接种环，接种针。

5、菌落形态观察原理：由于微生物个体表面结构、分裂方式、运动能力、生理特性及产生色素的能力等各不相同，因而个体及它们的群体在固体培养基上生长状况各不一样。按照微生物在固体培养基上形成的菌落特征，可从菌落的形状、大小、表面结构、边缘结构、菌丛高度、颜色、透明度、气味、粘滞性、质地软硬、表面光滑粗糙等情况，初步辨别是何种类型的微生物。

实验仪器

高压蒸汽灭菌锅、干热灭菌箱、恒温培养箱、pH计、电子天平，酒精灯、移液枪（枪头）、药匙、滤纸、镊子、接种环、接种针、玻璃刮刀、玻璃棒、滴管、锥形瓶500ml*2、250ml*3、烧杯500ml、250ml、50ml各一个，试管15支，玻璃培养皿20套，塑料培养皿15套，10ml移液管一支，，量筒500ml，100ml各一个，玻璃珠若干。

实验步骤

实验准备—灭菌—灭菌后的工作—-细菌的纯种分离及培养——细菌的接种