摘要
本研究以雌性昆明小鼠为试验动物，以陕西佛坪国家级自然保护区巴山木竹叶提取物（Bamboo leaf extract of Bashania fargesii）为试验材料，以不同温度、不同竹叶提取物（Bamboo leaf extract，BLE）灌注剂量为试验条件，建立不同环境温度下灌注BLE实验方法学，在此基础上探究不同环境温度下BLE对小鼠泌尿生殖系统的影响，为推测长期处于寒冷环境中的大熊猫在食叶期面临生物或非生物胁迫时，觅食策略是否与竹中此生代谢产物有关提供一种可能性。
内容1 不同环境温度下灌注BLE实验方法学的建立
将60只雌性小鼠随机分为5组，分别为常温对照组：NT+CON（25℃，0 mg/kg BW）、低温对照组：LT+CON（0℃，0 mg/kg BW）、低温低剂量组：LT+LBLE0℃，（340 mg/ kg BW）、低温中剂量组：LT+MBLE（0℃，680 mg/ kg BW）、低温高剂量组：LT+HBLE（0℃，1020 mg/ kg BW），每组12只，分笼饲养，持续2周。测定小鼠的脏器系数、血清中超氧化物歧化酶（SOD）含量、肝脏中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量以及血清中免疫指标和雌二醇含量。结果表明，不同环境温度下灌注BLE小鼠脏器系数无明显变化；温度会引起血清中SOD以及肝脏中SOD含量下降，低温条件下下灌注低剂量BLE使SOD含量上升，且肝脏中SOD含量显著上升（P<0.05），MDA含量变化为低温低剂量组高于其余组；不同灌注浓度下免疫因子含量低温低剂量组最低，不同灌注浓度下低温低剂量组雌二醇含量显著高于中剂量和高剂量组（P<0.05）。
内容2 不同环境温度下BLE对小鼠泌尿生殖系统的影响
使用2×2因子设计（温度：25℃、4℃；BLE灌注剂量：0 mg/kg BW、340 mg/kg BW），试验组为常温对照组：NT+CON；常温BLE灌注组：NT+BLE；低温对照组：LT+CON；低温BLE灌注组：LT+BLE四个组，每组6个重复，每个重复10只鼠，共240只鼠，开展为期28d的动物体内试验，试验分两个阶段进行研究，14d和28d。通过病理学诊断、细胞凋亡等检测指标探讨不同温度、BLE灌注剂量以及二者的相互作用对小鼠泌尿生殖系统的影响。
采用组织病理学方法，对小鼠卵巢和肾脏进行病理学观察，结果显示：，各组卵巢组织在14 d时和28 d时均未出现明显的病理变化，肾脏组织在14 d时，NT+CON组和NT+BLE组肾脏组织未出现明显病理学变化；LT+CON组小鼠肾脏组织中出现肾小管上皮细胞肿胀颗粒变性，管腔内见嗜伊红蛋白沉积现象，LT+BLE组肾脏组织中肾小球和肾间质毛细血管扩张充血，肾小囊内见少量丝网状嗜伊红蛋白沉积。28d 时，NT+CON组肾脏组织结构够完整，未见明显的病理学变化，NT+BLE组肾脏组织细胞中肾小管上皮细胞肿胀，颗粒变性，LT+CON组肾小管上皮细胞肿胀呈空泡状，且此状态细胞数目较多，LT+BLE组中肾小管上皮细胞肿胀程度较轻，且此状态细胞数目相对较少。
采用流式细胞术对小鼠肾脏细胞凋亡率进行检测。结果显示，28 d时BLE灌胃剂量水平对小鼠肾脏细胞凋亡率的影响达到极显著水平（P=0.004）。与CON组相比，BLE灌注组在14 d和28 d时肾脏细胞凋亡率上升，且上升幅度为14.94%。与CON组相比，BLE灌注组在14 d时肾脏凋亡率有所上升，上升幅度为14.31%；在28 d时，肾脏细胞凋亡率极显著上升（P=0.004），上升幅度为47.38%。
研究结果表明，在低温条件下对小鼠灌注340 mg/kg BW 的BLE最为符合实验理想条件。低温会导致小鼠泌尿系统出现损伤，对生殖系统影响不明显，灌注BLE能缓解损伤。根据本研究结果推测陕西佛坪大熊猫在冬季大量采食竹叶，可能有助于缓解其面临的寒冷胁迫，为探究其原因提供一种可能性。
关键字：低温；竹叶提取物；小鼠；泌尿生殖系统
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