IL-17及其受体通过Jagged-Notch信号通路调控Th1/Th2细胞失衡影响大鼠分泌性中耳炎发生发展的机制

中文摘要：

背景 耳鼻口科常见的疾病类型较多，其中分泌性中耳炎（SOM）的病发率属于较高水平病种。分泌性中耳炎（SOM）常见症状为听力明显降低以及中耳部分存在积液。分泌性中耳炎（SOM）是一种具有非化脓性特点的病症。听力损失持续存在或反复发作时，严重影响幼儿的语言发育、行为发展及性格形成，最终严重影响患者的生活质量。目前，自身免疫性因素促进SOM发生发展具体机制尚不明确。Th17细胞具有重要免疫调节效用，IL-17和受体两者由于特异性的缘由而结合，对于分泌性中耳炎中来说，扮演一个重要角色。 在正常情况下，当体内Th1 / Th2细胞处于相对平衡状态时，打破这种Th1/Th2 的平衡状态，就很可能破坏炎症因子的动态平衡，进而引起不少疾病的产生和发展。结合国内外的研究进展和研究组的初步研究基础，如下研究假设: IL-17结合IL-17R通过激活Jagged1-Notch信号通路，影响Th1/Th2 细胞比例，调控SOM发生发展。本研究通过构建SOM大鼠模型,通过运用RT-PCR技术, Western Blot , HE染色，PAS染色等技术加以研究。阐明IL-17结合IL-17R通过激活Jagged1-Notch信号通路，导致Th1/Th2 细胞失衡，调控SOM发生发展以及相关机制。

 

方法 动物处理：40只已经达到成年水平的性别为雄性的SD大鼠随机性分为4个人组别，分别为正常组、PBS组、SOM组以及SOM+IL-17组，每组的样本数量均为10只（20耳）大鼠。SOM组和SOM+IL-17组大鼠采用卵清蛋白腹腔注射致敏及鼓膜穿刺耳内激发2次制成变应原诱发的变态反应相关的的SOM大鼠模型，基于内镜下观察积液征验证建模成功，PBS组采用卵清蛋白腹腔注射致敏，耳内激发阶段将用PBS取代卵清蛋白加以耳内注射，SOM+IL-17组大鼠处理与SOM组一致，但在耳内激发前1小时加以鼻孔滴注IL-17抗体。

实验内容：注意HE染色后中耳内膜的病理变化； 酶联免疫吸附测定（ELISA）检测IL-17、、IL-4、IFN-γ在SOM大鼠外周血清和中耳灌洗液中的表达； Western Blot法观察IL-17、Notch1、Jagged1、DLL4在中耳组织中蛋白的表达;采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测大鼠外周血和中耳组织中IL-17，Jagged1，DLL4和Notch1 mRNA的表达水平。

 

结果 基于内镜观察和声导抗检查确认成功建立免疫相关的SOM大鼠模型。1.SOM大鼠模型组的中耳积液IL-17的含量显著高于正常组大鼠中耳灌洗液含量（P<0.05），而外周血浆中IL-17含量高于正常对照组外周血含量（P<0.05）2.基于光镜条件下的中耳组织的He染色切片显示模型组鼓膜及血管周围有明显炎症细胞浸润，细胞的排列呈现出紊乱的特点，上皮细胞则出现坏死、脱落等非良性现象，粘液则为水肿状态，血管壁也呈现出增厚的特点。而正常对照组的He染色切片则并没有出现明显的炎症细胞浸润，上皮细胞则呈现出排列整齐的特点。3. Real Time PCR结果显示与对照组相比，PBS组、SOM组、SOM+IL-17组中IL-17、Notch1、Jagged1、DLL4的mRNA表达均升高（P<0.05）,PBS组低于SOM+IL-17组，高于正常对照组（P<0.05）。4.Western Blot结果显示与正常组相比，SOM组IL-17、Notch1、Jagged1、DLL4蛋白表达明显升高，PBS组和SOM+IL-17组各蛋白表达低于模型组（P<0.05）。

 

结论SOM的免疫相关发病机制可能与IL-17密切相关，而IL-17是如何调节SOM的发展尚不明确；IL-17作为重要的免疫介质参与到SOM进展中，并且可能通过Notch信号通路调控Th1/Th2细胞失衡来实现。

关键词 分泌性中耳炎 白介素-17 Notch信号通路 Th1/Th2失衡

 

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